Макро, микро и супермикро… или зачем металловеду электронный микроскоп.

Форум » Общие вопросы » Макро, микро и супермикро… или зачем металловеду электронный микроскоп. » Ответить

Макро, микро и супермикро… или зачем металловеду электронный микроскоп.

SAE: Макро, микро и супермикро… или зачем металловеду электронный микроскоп. Как металловеды используют металлографический микроскоп, вы уже знаете. Об этом было здесь - http://mycoweb.narod.ru/fungi/Informe/Photographing_of_mushroom_spores.html Как приспособить электронный микроскоп для решения своих задач? Прежде всего, нужно выполнение нескольких обязательных условий. Первое – Вы должны сформулировать решаемые задачи. Второе – нужен сам микроскоп. Третье – время и желание владельцев микроскопа тратить это самое время на Вас.

Ответов - 35, стр: 1 2 All

SAE: Итак, вооружаемся объектами для исследований, десятком банок пива и едем в гости в одну замечательную организацию, которую просили нигде не называть… Начнём с того, что у нас была возможность выбора, на каком микроскопе семейства VEGA проводить исследования. Выбрали VEGA II XMU, кроме того, химический анализ нам был не нужен. Следующий необходимый шаг перед откупоркой банок с пивом…? Правильно! Пиво нужно охладить, а биологические объекты, к коим относятся споры (не электропроводные, заметим) нужно металлизовать, чтобы избежать заряда объекта и последующих негативных явлений, таких как появление белых размазанных «хвостов» на изображении, или, что значительно хуже, сдувания лёгкого объекта электронным «ветром». Итак, холодное пиво, металлизованные объекты и электронный микроскоп… Небольшое отступление. Электронно-микроскопические изображения сопровождены фотографиями спор, выполненными на обычном металлографическом микроскопе, и, конечно же, фотографиями самого Его Величества Гриба. В том числе и стерео. Начнём с банальных грибов – хорошо известный всем Подосиновик красный (Leccinum aurantiacum) с гладкими спорами. Действительно, в случае гладкой поверхности спор электронная микроскопия не даёт существенных результатов. Сравните сами оптическую фотографию и ЭМ-изображение. Следующий объект – Дисцина щитовидная (Discina_perlata). Перекрёстная и прямая пары. Гладкая (почти гладкая) поверхность споры, и электронная микроскопия даёт возможность увидеть мельчайшие детали строения поверхности. Однако мы с Вами тут же замечаем существенный недостаток электронной микроскопии – она не даёт возможности заглянуть внутрь объекта и изучить его строение. Псевдоплектания черноватая (Pseudoplectania nigrella). Перекрёстная и прямая пары. Всегда задавался вопросом, что за «глазки» видны на микрофотографии сухих спор Псевдоплектании? Они, кстати, исчезают при размачивании спор. И вот он – ответ! Это «впуклости» или «впячивания» на сферической поверхности споры, что отчётливо передаёт ЭМ-изображение. Ивишень или Огуречный гриб (Clitopilus prunulus). «Семечки» спор, сухие и размоченные. На ЭМ-изображении хорошо видны белые «хвосты», вызванные перезарядкой недостаточно металлизованных объектов.

SAE: Паутинник багряный (Cortinarius purpurascens). Здесь мы видим, что и оптическая и электронная микроскопия хорошо передают характер поверхности спор этого гриба. Однако если на оптической фотографии видно только, что поверхность спор шероховатая, то на ЭМ-изображении отчётливо видны особенности строения поверхности. Кроме того, мы видим и ещё один недостаток электронной микроскопии – она не умеет передавать цвет! Энтолома прекрасная (Entoloma nitidum). Перекрёстная и прямая пары. На микрофотографии хорошо видна характерная угловатая форма энтоломовых спор. Что же нам показывает электронный микроскоп? Неужели это просто скомканные маленькие бумажки? Волоконница звёздчато-споровая (Inocybe asterospora). Не зря этот гриб получил своё имя… Сколько лучей у звёздочек-спор? На ЭМ-изображении детали видны намного лучше, и мы можем без труда подсчитать лучи. Сколько у Вас получилось в среднем на одну спору? Млечник жгуче-млечный (Lactarius pyrogalus). Для млечников (Lactarius), как и для сыроежек (Russula), одним из ключевых признаков их идентификации является количество, форма и взаимное расположение шипов и гребней на поверхности спор. Только, к сожалению, наблюдать эту красоту в оптический микроскоп без иммерсионной жидкости практически не возможно. Другое дело – микроскоп электронный с его высокой разрешающей способностью и глубиной резкости… Другой Млечник – Млечник дубовый (Lactarius quietus). Другой вид млечника, и совершенно иное расположение шипов и гребней на поверхности спор. Наконец - Волнушка белая (Lactarius pubescens). Опять шиповатые споры и их форма – идентификационный признак. Объект был недостаточно металлизован и часть спор просто унесло электронным "ветром". Видите три тёмных пятна? Там только что были споры…

SAE: Рогатик Инвала – (Ramaria invalii). Вытянутые (и прохожие на семечки) шиповатые споры. "Какие красивые бяки" – сказала моя коллега по работе. Телефора кисточковидная – (Thelephora penicillata). Когда я первый раз нашел этот гриб и не знал ещё, как его называют, был приятно удивлён тем, что форма спор до удивления напоминает форму самого гриба. Гриб был старый, и споры у старого гриба получились неказистые. Однако неказистость тут же исчезла, стоило только воспользоваться электронным микроскопом. Планета Маленького принца – решили мы! Опять Телефора кисточковидная, на этот раз посвежее. К слову сказать, найти телефору – непростая задача. Уж очень хорошо она маскируется. Гриб в самом расцвете сил, и споры у него фотогеничные. Опять планета Маленького принца. Зачем ему столько? Траметес жёстковолосисстый – (Trametes hirsuta). Фотографируя споры этого гриба, был убеждён, что часть спор (та, которая выглядит как округлые частицы) располагается вертикально, "втыкаясь" в поверхность стекла. Электронная микроскопия показала, что споры при падении буквально расплющиваются и намертво прилипают к стеклу. Энцелия шелушистая – (Encoelia furfuracea). Аналогичная ситуация со спорами энцелии. Отличие состоит только в том, что к стеклу в основном приклеиваются комки (конгломераты) спор, покрытые довольно толстым слоем слизи. "Краковские колбаски в желе". При металлизации такого конгломерата получается малоконтрастная картинка, потому что тонким слоем золота покрывается поверхность и спор и "желе", в котором они плавают. Попадаются и одиночные споры.

SAE: Лензитес березовый – (Lenzites betulina). Попытка получить изображение спор на базидиях закончилась блестящим подтверждением тезиса о том, что ВСЁ в грибах состоит из гиф. А что споры?.. А споры все улетели-высыпались. Пикнопорус киноварный – (Pycnoporus_cinnabarinus). "Гифы грибов способны тесно переплетаться, образуя ложную ткань – плектенхиму". Напоследок – несколько историй из мира грибов и примкнувших. Дедалеопсис трёхцветный – (Dedaleopsis_tricolor). Перекрёстная и прямая пары. Каким ветром в гименофор гриба занесло чешуйки с крыла бабочки? Наверное, мы это никогда не узнаем. Чешуек было много. Но, к сожалению, почти все они были унесены "ветром" (электронным). Осталась только одна неказистая. Неопознанная жёлтая сыроежка – (Russula sp). Грибной клещ Пигмефорус (Pygmephorous). Зачем он здесь? Кстати, споры сыроежки ему, по-моему, как раз "по зубам". Принимаются любые критические и конструктивные высказывания.

Grey: SAE ААААААААААААффигеть!!!!!!! ТАКОГО наверное еще никто не делал! Слов нет! Спасибо ОГРОМНЕЙШЕЕ! Такой позитив с утра!

coloboc: А почему не в виде статьи на сайт?

Grey: SAE Да, это должен увидеть мир! Обязательно статью на сайт!

ZAE: SAE Сказать впечатляет - ничего не сказать. Ошеломляет и потрясает! Микологам, да и не только, при взгляде на подобные сканы спор гарантировано обильное слюноотделение.

theria: SAE Есть к чему стремиться Не удивлюсь, если скоро здесь увижу грибные ДНК штрих-коды.

jmette: SAE Тут даже смайлики не oчень пoмoгают. Слoв нет. Огрoмнoе Вам спасибo, Андрей! Эту рабoту (и вoзмoжные ее расширения?) надo публикoвать и в виде статьи, абсoлютнo сoгласен с coloboc ! А передo мнoй - oчередная, приятная задача: Перевoдить эту штуку и oтдать друзям на чтение...

Kessler: SAE Да, впечатляет. Вот что интересно: "шипы" на спорах. Это по типу репейниковых "ёжиков", чтоб лучше цепляться? Мало того, что споры почти невесомы, да ещё есть возможность прицепиться и... перекочевать на другой континент!

Галина Ив.: Андрей, ошеломляюще замечательная работа! Действительно, не хватает слов... Однозначно, такой материал требует статейного статуса.

kut: SAE, фантастика!

TVS: SAE Вот это прорыв!!!

vstepanov: SAE Андрей, если надумаете публиковать на сайте - самый зеленый свет такому шикарному материалу я гарантирую. Даже от рыбалки на пару-тройку дней отвлекусь ради такого шедевра.

Юрий С.: Андрей! А-бал-деть! Обязательно "отчет"на сайте! (Что значит, "если надумаете"???), подработать -и на сайт! Да, с таким микроскопом можно работать...

ariona: SAE 1. Жаль, что я не металловед 2. Жаль, что не могу выполнить 1 и 3 обязательные условия в связи с отсутствием 2 3. Прими восхищение твоей неиссякаемой энергией, жаль, что у меня нет сотой доли таковой. Мне еще вот что кажется. При опубликовании на сайте(нет сомнений, спасибо Вячеславу!) нужно в каждую твою статью отсюда дать ссылки на соответствующие описания на сайте, а что еще лучше - в каждом описании иметь эти фото в полном объеме! Андрей, ты поднимаешь сайт, мне кажется, на более высокий уровень. Спасибо!

Stalker: SAE, фантастический материал! Огромное спасибо Вам за Вашу работу! Надеюсь, что Вы будете продолжать работать в этом направлении с обязательным размещением материалов на сайте.

ressaure: Потрясающе, просто слов нет! Целый новый мир! Огромное спасибо!

eugene: SAE Браво!! До чего техника дошла... Я с нашим Цейсом тихо уползаю под лавку SAE пишет: Всегда задавался вопросом, что за «глазки» видны на микрофотографии сухих спор Псевдоплектании На самом деле "глазки" - это газовые пузырьки, которые образуются при обезвоживании цитоплазмы спор (так наз. пузырьки Де Бари). При попадании спор в воду они естественным образом исчезают. А на электронных снимках видны спавшиеся (как сдувшийся мяч) из-за вакуума в котором они находятся споры.

SAE: Друзья, спасибо всем высказавшим своё мнение по поводу статьи. Grey пишет: Такой позитив с утра! Рад, что доставил всем такое удовольствие. Самому приятно. Спасибо. Теперь небольшая дискуссия. Grey пишет: Обязательно статью на сайт! coloboc пишет: А почему не в виде статьи на сайт? Статья обязательно появится. А на форуме проще и быстрее её "обкатать". jmette пишет: А передo мнoй - oчередная, приятная задача: Перевoдить эту штуку и oтдать друзям на чтение... Спасибо за пропагандирование идей электронной микроскопии среди немецких друзей. eugene пишет: Я с нашим Цейсом тихо уползаю под лавку Электронная микроскопия лишь дополняет оптическую, а никоим образом её не отменяет. Цвет и внутреннее строение ЭМ недоступны. Пока. Stalker пишет: Надеюсь, что Вы будете продолжать работать в этом направлении Безусловно! Мне доставляет удовольствие с друзьями работать на великолепном оборудовании и пить пиво. Два дня работали, всё было - и юстировка микроскопа, и обсуждение рабочих вопросов (по роду деятельности мы металловеды) и грибных моментов (кто ж не любит собирать грибы?), и, конечно же, пиво. ariona пишет: нужно в каждую твою статью отсюда дать ссылки на соответствующие описания на сайте, а что еще лучше - в каждом описании иметь эти фото в полном объеме! В каждом описании ЭМ изображения (не фотографии - именно изображения, которые рисуют электроны) появятся обязательно, стоит только отправить материалы Вячеславу. А идею насчёт ссылок поддерживаю. Kessler пишет: Вот что интересно: "шипы" на спорах. Это по типу репейниковых "ёжиков", чтоб лучше цепляться? Наверняка так. Эту мысль нужно будет обдумать. Интересно. eugene пишет: На самом деле "глазки" - это газовые пузырьки, которые образуются при обезвоживании цитоплазмы спор (так наз. пузырьки Де Бари). При попадании спор в воду они естественным образом исчезают. А на электронных снимках видны спавшиеся (как сдувшийся мяч) из-за вакуума в котором они находятся споры. На самом деле газовые пузыри в вакууме должны разорвать спору на части, хотя я думаю, газ просто диффундировал через оболочку споры. Встречались два типа спор - с "глазками" - пузырьками де Бари, и со сдувшимися стенками. Короче говоря - ОМ и ЭМ показывают нам два различных объекта. Эту часть материала следует дополнить ещё оптической фотографией (она есть) и переписать, что и будет сделано немного позже. vstepanov пишет: Андрей, если надумаете публиковать на сайте - самый зеленый свет такому шикарному материалу я гарантирую. Даже от рыбалки на пару-тройку дней отвлекусь ради такого шедевра. Уже давно надумал. Материал почти готов к размещению. Нужно чуть подправить некоторые шероховатости, определить неопределённую до сих пор сыроежку, уточнить видовую принадлежность млечника серого и, самое главное, научиться предоставлять материал в виде HTML. Чтобы в полевой сезон не отвлекать сильно Админа от работ в поле.

Velibor: Андрей, сказать что я в шоке, ничего не сказать. Такое ощущение, что увидел живых инопланетян. Спасибо огромною и ждём статью на сайте.

kut: Velibor пишет: сказать что я в шоке, ничего не сказать SAE пишет: тонким слоем золота покрывается поверхность спор Маски фараонов SAE, а какова предельная разрешающая способность такого микроскопа?

SAE: kut пишет: Маски фараонов SAE, а какова предельная разрешающая способность такого микроскопа? Кстати, золото напыляется настолько тонким слоем, что после этого споры можно размачивать в воде или щелочном растворе, и фотографировать на оптике. http://www.tescan-usa.com/VEGA.htm 3 нанометра.

kut: SAE, спасибо! 0.003 мкм ... Вот и у меня слова закончились!

Leptonia: SAE Спасибо большое! Получила огромное удовольствие. Это, действительно, прорыв! Верю, что последовательности ДНК на сайте не за горами. Не зря говорят - Не имей сто рублей, а имей сто друзей. Споры Entoloma nitidum конструктивно оказались более слабыми, чем многие другие из Ваших образцов (Ведь как замечательно видны шипы, ребра и гребни у сыроежки, волоконницы, млечников!) А тут скомканные бумажки. Просто оболочка спор Entoloma nitidum более тонкая и углы менее выражены, чем у других видов рода (подумывают перевести ее в Rhodocybe. Поэтому споры легко спадаются, что и видно на Вашем замечательным снимке.

аимаина хикари: SAE пишет: На самом деле газовые пузыри в вакууме должны разорвать спору на части, хотя я думаю, газ просто диффундировал через оболочку споры. В микромире часто всё происходит не так, как в нашем привычном, действительно, пузырьки вполне могли не разорвать спору а тихо улетучиться диффузией. Вакуум-то в микроскопе наверное не мгновенно набирается.

аимаина хикари: Grey пишет: ТАКОГО наверное еще никто не делал! Есть, конечно, в литературе ЭМ-изображения спор, но из микологов-любителей такого наверняка ещё никто не делал

Foxy: ОГО!!! Это же мечта! SAE - а может быть Вы волшебник? И можете исполнить мечту? Может быть Вы разрешите уже занять очередь для получения чудо фотографий спор Clitocybe, Lepista и прочих похожих на них? У многих видов этих родов такие крошечные бесцветные (или почти) споры с плавными переходами от гладкой до орнаментированной поверхности, что разобраться в них с моим Биоламом можно скорей по интуиции, чем по реальной картинке. А тут такое!!! SAE пишет: Нужно чуть подправить некоторые шероховатости, определить неопределённую до сих пор сыроежку, уточнить видовую принадлежность млечника серого Вот теперь, с такими фотографиями гораздо увереннее можно говорить об определении сыроежек, млечников и других видов с орнаментированными спорами. Ваш млечник серый скорее всего Lactarius pyrogalus, если там, где собирали образец рос орешник. Этот вид довольно близок к серушке (в одной секции) и внешне тоже довольно похож - относительно редкие желтоватые пластинки, наличие серого тона в шляпке, но обычно чуть более клейкий, чем flexuosus, в окраске больше желтоватого, и растет с орешником. И конечно, споры! На вашем снимке видно, что у спор довольно высокие, но редкие и почти изолированные, не соединенные сетью хребтики. У L.flexuosus - хребтики соединены тонкими линиями, формирующими неполную сеть. Кроме того споры L.pyrogalus чуть поменьше и соответствуют нужным размерам (я измерила, пользуясь вашим масштабом на эл.снимке) - 5-7,5х4,5-6 (против 6-8,5х5-7 у flexuosus) По поводу сыроежки. Не считаю себя знатоком большой и сложной группы сыроежек, но не могу отделаться от ощущения, что это родственник валуя. За: невнятный желтовато-коричневатый неровный цвет, клейкость (сверху виден прилипший мусор), вздуто-желобчатый край, появление грязновато-бурых пятен на пластинках и ножке. Споры у видов этой группы такие . Похоже? Неизвестны только запах и вкус, которые помогли бы определить вид (их несколько похожих в этой секции)

SAE: Foxy Все приметы совпадают, и орешника там навалом. Записываю в Lactarius pyrogalus - Млечник жгуче-млечный. Сыроежка действительно смахивает на валуй. И я её вначале назвал С.валуйная, но это другой гриб. Запах и вкус вряд ли я вспомню, скорее ничего особенного. А какие варианты?

Foxy: SAE C похожими спорами в валуйной секции есть R.pectinatoides, R.pectinata, R.foetens, R.subfoetens. Сам валуй Вы скорее всего отличили бы в поле - он сильно пахнет и обычно более сопливый (хотя если тепло и сухо даже у людей сопли пропадают :)). Но по размеру спор на Ваших снимках валуй подходит лучше всех (7.5-10 x 7-8.5), если масштаб абсолютно точен... А дальше идти проблематично, поскольку не известны запах и вкус и, увы, отрезано основание ножки. У R.pectinatoides и R.pectinata основание ножки бывает красно-бурое. И еще отмечают иногда такого же цвета пятнышки на других частях пл.тела (при старении). У первой вкус мягкий ил чуть островатый, но неприятно маслянистый и как бы вяжущий, запах не сильный (если специально не нюхать, можно не обратить внимание), но тоже неприятный (трудно описать, что-то с оттенком лежалой жирной рыбы). У второй запах похожий по неприятности, а вкус очень острый. И еще есть R.subfoetens. Привожу описание Sp 7-9.5 x 6-7.5 µm, ellipsoid, verrucose with some crests, warts up to 0.8 µm (ﬁg. 115E); cap 50-100(-140) mm. Cap convex, soon becoming applanate, at margin tuberculate-sulcate, sticky, pale yellow, yellow to brown or red brown; gills whitish to dirty cream, becom- ing brown spotted when old; stem 50-80 x 15-25 mm, whitish, becoming brown spotted, ± hollow; ﬂesh whitish, but distinctly yellowing, especially after treatment with KOH; taste moderately acrid in the gills; smell weak, slightly fruity; sp deposit cream (IIbc). Dcy in pileipellis not reacting with SV. In deciduous forests with Betula, Populus, Fagus and Quercus and in herb-rich Picea forests; summer to autumn; rare in temp.-bore., but possibly confused with related species. R. subfoetens W.G. Sm R.pectinatoides у меня в области довольно обычна, два других определять не доводилось, хотя легко могла пропустить из-за похожести.

SALAVAT: SAE Потрясающе! Слов нет.

svt: Виноват, что давно не просматривал форум и пропустил этот топик. Но сами фотографии видел в новых поступлениях, много восхищался и показывал своим близким. Надеялся, что скоро появится статья на сайте ГКО. Присоединяюсь к восторженным отзывам участников. Браво!

Stvov: SAE Круто и очень интересно! А споры миксомицетов будут?

Grey: Stvov Восхищаюсь Вашими работами! Завидую белой завистью. Присоединяюсь к просьбе посмотреть споры миксов на электронном микроскопе. На пиво скинемся :)

полная версия страницы